Интерес к Приамурью возобновился лишь в середине XIX века. Поражение в Крымской войне подтолкнуло Российскую империю вернуться к вопросу определения своей восточной границы. Китай тем временем был охвачен Второй опиумной войной с Великобританией и Францией. Чтобы укрепить дипломатические отношения с Россией и избежать войны на два фронта, китайское правительство согласилось подписать Айгунский договор. Так, 16 мая 1858 года между двумя империями была проведена граница: левый берег Амура провозглашался российским владением, а правый — до реки Уссури — закреплялся за Китаем.

Прошёл год, но китайцы не ратифицировали документ и отказались возвращаться к переговорам: краткосрочный успех в Опиумной войне убедил их в возможности отразить иностранную угрозу самостоятельно. Однако в сентябре 1860 года ход военного конфликта вновь переломился: англо-французские войска подошли к Пекину. Тогда Китай попросил Россию выступить посредником в переговорах с западными державами. В результате Пекин был спасён от штурма, а многолетняя Опиумная война закончилась. Через несколько дней Россия и Китай заключили Пекинский договор, по которому Приамурье окончательно стало российской территорией.